단백질 분자량 결정: SEC-MALS 대 일반 보정(Conventional calibration)

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단백질 분자량 결정: 

SEC-MALS 대 일반 보정(Conventional calibration)

용액 내 단백질의 물리적 특성과 거동은 단백질의 순도 및 제형과 관련된 여러 요소뿐만 아니라 자체가 갖는 고유 특성에 따라 달라집니다.

 

크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 단백질의 복원, 분자량, 응집과 같은 요소를 살펴보는 데 일반적으로 사용하는 강력한 도구입니다. 

 

SEC의 원리는 투과성이면서 불활성인 컬럼 매트릭스를 통과하면서 시료를 분리하는 것과 관련되어 있습니다. 작은 분자는 포어를 더 깊게 통과하고 큰 분자는 제외되므로 컬럼을 더 빠르게 통과합니다.  그 결과는 유체역학적 부피를 기준으로 하는 분리이지만 최종 목적은 일반적으로 분자량을 확인하는 것입니다.

 이전에는 분자량을 미지 단백질의 용리 시간을 분자량이 알려진 표준 원형 단백질과 비교하여 분자량을 추정하였으며, 이방법을 ‘일반 보정(Conventional Calibration)’이라고 합니다. 이 방법은 자외선(UV) 등의 단일 농도 검출기를 사용하여 수행했습니다.  

< Malvern Viscotek SEC-MALS 20 시스템 > 

 

하지만 이제는 광 산란 검출기와 농도 검출기(UV 또는 굴절률, RI)를 함께 사용하여 머무른 시간과 상관없이 단백질 분자량을 측정할 수 있습니다.  대부분의 단백질은 원형 구조가 아니어서 측정된 분자량이 정확하지 않기 때문에 매우 유용한 기술입니다.  두 번째 농도 검출기, IV(고유 점도), DLS(동적 광 산란) 등의 검출기를 추가할 경우 단일 SEC 측정에서 이용 가능한 정보의 양이 크게 증가합니다.

 

Malvern Viscotek SEC-MALS 20 시스템은 용리 용적과 상관 없이 단백질 분자량을 측정할 수 있는 20개의 검출각을 갖고 있는 광 산란 장비입니다.  이 응용 노트에서는 SEC를 사용하여 다양한 단백질을 분리에 대한 내용을 안내 드립니다. 

 

또한, MALS(Multi Angle Light Scattering: 다각도 광 산란) 또는 일반 보정으로 분자량을 측정한 다음  결과의 차이에 대해 논의합니다.

 


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